1、提取
10 g 与20 mL 0.1% 磷酸溶液,涡旋混合5 min,待净化。
2、净化
SCX 500 mg/6 mL
a 活化: 将5 mL 甲醇、5 mL 水加入小柱,流出液弃去;
b 上样: 将样品加入小柱*,流出液弃去;
c 淋洗: 依次用5 mL 0.1% 磷酸溶液、5 mL 水淋洗,流出液弃去;
d 洗脱: 30 mL 0.2 mol/L 磷酸氢二钾溶液(磷酸调节pH 8.0),洗脱,收集洗脱液,用磷酸调节pH 2,待下一步净化
C18 500 mg/6 mL
a 活化: 将5 mL 甲醇、5 mL 水加入小柱( C18,500 mg/3 mL),流出液弃去;
b 上样: 将样品加入小柱*,流出液弃去;
c 淋洗: 5 mL 0.1% 磷酸溶液淋洗C18 柱,流出液弃去,抽干小柱,再用5 mL 甲基叔丁基醚+ 正己烷混合溶液(4+1)淋洗,流出液弃去;
d 洗脱: 10 mL 甲醇洗脱,收集洗脱液
e 重新溶解:35 ºC 下将洗脱液减压蒸馏至干,1 mL 流动相定容,微孔滤膜过滤后,HPLC 分析